中文简体
Geçen hafta mükemmel şekilde çalışan bir degrade yöntemini çalıştırdınız. Kalibrasyon standartları temiz görünüyor ancak numune kromatogramı 23,8 dakikada ekstra bir zirve gösteriyor. Kolonu değiştiriyorsunuz, yeni tampon hazırlıyorsunuz ve dedektörü kontrol ediyorsunuz. Zirve hâlâ orada. Daha sonra hareketli faza giden suyu değiştirirsiniz ve eser kaybolur. Yüksek performanslı sıvı kromatografisinin gerçeği budur: suyun saflığı her ayrımın altında yer alır ve değiştiğinde yöntem de onunla birlikte değişir.
Suyun saflığı, HPLC veri kalitesini dört pratik yolla etkiler: temel stabilite, tepe şekli, tutma tekrarlanabilirliği ve cihazın ömrü. İlgili kirletici maddeler organik moleküller, çözünmüş iyonlar, parçacıklar veya mikroplar olabilir. Bir tür safsızlığın küçük bir miktarı bile konsantrasyonuyla orantısız sonuçlar doğurabilir.
Su Saflığının HPLC Üzerindeki Ana Etkileri
Bir HPLC sisteminde su, pasif bir arka plan değil, bir reaktiftir. Tamponu taşır, numuneyi çözer ve dedektör arka planına katkıda bulunur. Bu nedenle sudaki yabancı maddeler doğrudan analitik sinyale geçer. Aşağıdaki tablo en yaygın kirleticileri ve etkilerini özetlemektedir.
| kirletici | Örnekler veya Kaynak | HPLC'deki etki |
|---|---|---|
| Çözünmüş organikler | Hümik maddeler, plastikleştiriciler, temizlik kalıntıları, solvent buharları | UV emici hayalet tepe noktaları, taban çizgisi kayması, tutma değişiklikleri |
| inorganik iyonlar | Sodyum, klorür, silikat, eser metaller | İletkenlik değişiklikleri, iyon kromatografisi ve LC-MS'de girişim, metalle ilgili tepe noktası genişlemesi |
| Partiküller | Reçine parçacıkları, toz, çökeltiler | Engellenen cam parçaları, artan karşı basınç, pompa contasının aşınması, gürültülü taban çizgisi |
| Çözünmüş gazlar | Oksijen, karbondioksit, nitrojen | Dedektörde kabarcıklar, taban çizgisinde ani yükselmeler, pH kayması |
| Mikroorganizmalar | Saklama kaplarındaki bakteri ve biyofilmler | Sütun kirlenmesi, tıkalı fritler, sahte pikler, yöntem kararsızlığı |
Bu etkiler sadece teorik değildir. Bir su rezervuarındaki mikrobiyal biyofilm, UV emici metabolitleri serbest bırakabilir ve bu film oluştuğunda, sadece suyun değiştirilmesi, rezervuar temizlenip sterilize edilene kadar sorunu çözmeyebilir.
"HPLC Sınıfı" ve Tip 1 Su Aslında Ne Anlama Geliyor?
Analitik yöntemlerin çoğu, Tip 1 spesifikasyonlarını karşılayan suyu gerektirir. Pratik anlamda bu, 25 santigrat derecede direncin yaklaşık 18,2 megohm-santimetre olduğu, iletkenliğin santimetre başına 0,055 mikrosiemens civarında olduğu ve toplam organik karbonun, suyun görünür bir UV veya MS arka planı oluşturmayacak kadar düşük olduğu anlamına gelir. Direnç tek başına yeterli değildir. Ayrıca TOC seviyesini, partikül sayısını ve bazı uygulamalarda silikat veya sodyum değerlerini de bilmeniz gerekir.
Arıtılmış suyun pH'ı kullanışlı bir spesifikasyon değildir. Ultra saf suyun neredeyse hiç tamponlama kapasitesi yoktur ve havadaki karbondioksiti hızlı bir şekilde emer; dolayısıyla 5,6 civarında ölçülen pH, çözünmüş CO2'yi yansıtır. Önemli olan pH, hazırladığınız tamponlu mobil fazın pH'ıdır.
Su kalitesi gereksinimleri aynı zamanda dedektöre de bağlıdır. 210 nm'de UV tespiti özellikle organik kirlenmeye karşı hassastır çünkü birçok karbon-oksijen ve karbon-nitrojen bağı burada emilir. LC-MS, iyon baskılanmasını ve katkı maddesi oluşumunu önlemek için çok düşük uçucu olmayan safsızlıklara sahip suya ihtiyaç duyar. Buharlaşmalı dedektörler, arka plan sinyalini yükselttiği için uçucu olmayan kirlenmeden benzer şekilde etkilenir. Bu nedenle Tip 1 su hemen hemen her HPLC uygulaması için sağlam bir başlangıç noktasıdır.
Şişelenmiş HPLC kalitesinde su işe yarayabilir ancak doğru şekilde saklanması ve kullanılması gerekir. Analiz sertifikasını kontrol edin, lot numarasını kaydedin ve asla eski bir kabın biyolojik büyüme içermediğini varsaymayın.
Gradyan Elüsyon Sudaki Kirlilikleri Görünür Hale Getirir
Sudaki safsızlıklar en çok gradyan yöntemlerinde görülür. İzokratik bir çalışmada, UV emici bir kirletici madde taban çizgisini biraz yükseltebilir. Bir gradyanda, su fraksiyonu yüksekte başlar ve organik solvent fraksiyonu zamanla artar. Kirletici maddeler kolonun başında tutulabilir ve organik içerik arttıkça elüte edilebilir. Bu, hayalet zirvelere ve entegrasyon ve nicelik belirlemeye müdahale edebilecek kayan bir taban çizgisine neden olur.
Bu nedenle boş gradyan su kalitesi için en basit kontrollerden biridir. Bir numune enjekte etmeden tam degradenizi çalıştırın. Eğer boşlukta pikler görünüyorsa hareketli faz şüphelidir.
Suyun Saflığını Koruyan Günlük Alışkanlıklar
Saf su tesadüfen saf kalmaz. Aşağıdaki alışkanlıklar HPLC uygulamasında en sık karşılaşılan sorunları önler.
- Yeni kartuşlar, çalışan bir UV lambası ve düzenli sanitasyona sahip bir arıtma sisteminden gelen suyu kullanın.
- Suyu temiz, kapaklı bir kapta toplayın. Sistem çalışırken konteyneri açık bırakmayın.
- Günlerce su saklamayın. Mobil fazı mümkün olduğunca aynı gün tatlı su ile hazırlayın.
- Kısmen doldurulmuş bir rezervuara tatlı su eklemekten kaçının. Rezervuar içeriğini doldurmak yerine değiştirin.
- Analiz için kullanılan dalga boyunda boş bir degrade çalıştırın ve sonucu kaydedin.
- Direnç, TOC ve su toplama tarihini analitik kayıtlarınızda belgeleyin.
Şişelenmiş su kullanan laboratuvarlar için de aynı kurallar geçerlidir. Son kullanma tarihini kontrol edin, kullandıktan sonra kabı hemen kapatın ve kullanılmamış suyu beherden şişeye geri koymayın.
Katkı Maddeleri Su Sorununu Yöntem Sorununa Dönüştürüyor
Hareketli fazlar nadiren tek başına su içerir. Tampon tuzları, asitler, iyon çifti reaktifleri ve bazı özel değiştiriciler nispeten düşük konsantrasyonlarda eklenir. Su eser miktarda UV emici yabancı maddeler içeriyorsa, bu yabancı maddeler tampon kapasitesini değiştirmeyebilir ancak yine de dedektör sinyalinde görünebilir.
İyonik sıvılar bazen tepe şeklini veya seçiciliği geliştirmek için mobil faz değiştiriciler olarak kullanılır. Birini seçtiğinizde aynı saflık standardı geçerli olmalıdır. Örneğin, 1-etil-3-metilimidazolyum tetrafloroborat Kromatografik çalışmalar için yaygın olarak kullanılan bir iyonik sıvıdır. Zaten Tip 1 spesifikasyonlarını karşılayan suda çözülmelidir; aksi takdirde katkı maddesi başka bir kontaminasyon kaynağı haline gelir. Bu bileşiklerin ayrılmayla ilgili özelliklerini anlamak istiyorsanız, İyonik sıvıların ayırma işlemlerinde nasıl performans gösterdiğine genel bakış pratik değişkenleri kapsar.
CAS:143314-16-3-1 -Etil-3-metilimidazolyum Tetrafloroborat Sıvı Tedarikçisi Ldet Teknolojisi Çin'e özel CAS:143314-16-3 -1 -Etil-3-metilimidazolyum Tetrafloroborat Sıvıları tedarikçileri ve 1 -Etil-3-metilim... Ürünü Görüntüle → Saflık Tedarikçiyle Başlar
Zhejiang Ldet'te iyonik sıvılar ve özel kimyasallar üretiyoruz. Üretimden, bir başlangıç malzemesindeki eser miktardaki yabancı maddenin, sonraki performansı değiştirebileceğini biliyoruz. Bu nedenle piyasaya sürülmeden önce su içeriğini, kalan halojenürleri ve UV davranışını kontrol ediyoruz. Aynı disiplin HPLC laboratuarına da aittir: belgelenmiş spesifikasyonlara sahip malzemeleri seçin. Örneğin, 1-bütil-3-metilimidazolyum tetrafloroborat tespit yönteminizle uyumlu olup olmadığını değerlendirmenizi sağlayan saflık verileriyle birlikte mevcuttur.
CAS: 174501-65-6-1-Butil-3-metilimidazolyum tetrafloroborat Sıvı Tedarikçileri Ldet Teknolojisi Çin'e özel CAS'tır: 174501-65-6-1-Butil-3-metilimidazolyum tetrafloroborat Sıvı tedarikçileri ve 1-Butil-3-metilimid... Ürünü Görüntüle → Analiz Sertifikasında Nelerin Kontrol Edilmesi Gerekir?
- Artık halojenür içeriği, çünkü halojenürler iyon değişimi ayrımlarını ve korozyonu etkileyebilir.
- Su içeriği, çünkü su, katkı maddesinin etkin konsantrasyonunu değiştirir.
- UV spektrumu veya UV kesme değeri sayesinde arka plan absorbansını tahmin edebilirsiniz.
- Partiden partiye tutarlılık, çünkü yeni bir partinin yönteminizi sessizce değiştirmemesi gerekir.
Bir materyali bir yöntemle eşleştirme konusunda yardıma ihtiyacınız varsa, saflık verilerini ve özel gereksinimleri teknik ekibimizle tartışın .
Suyu Yöntemin Bir Parçası Olarak Arıtın
HPLC'de su saflığı tek seferlik bir kurulum değildir. Mevsime, saklama şişesine ve arıtma sisteminin durumuna göre değişebilen günlük bir değişkendir. Tip 1 su kullanın, TOC'yi ve direnci doğrulayın, uygun şekilde kullanın ve izlenebilirliği olan katkı maddelerini seçin. Nanogram analit üzerine inşa edilen bir yöntemde, su asla "sadece su" değildir.
